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細(xì)菌、真菌污染

細(xì)菌和真菌污染很容易被檢測(cè), 因?yàn)槭艿郊?xì)菌、真菌污染的細(xì)胞, 培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞培養(yǎng)瓶的培養(yǎng)基會(huì)出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的明顯特征。細(xì)菌污染會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁、顏色改變以及pH值急劇變化, 受污染的貼壁細(xì)胞在幾天內(nèi)會(huì)逐漸脫壁死亡。真菌污染后的細(xì)胞生長(zhǎng)速度變慢, 培養(yǎng)基中會(huì)漂浮白色、淺黃色或黑色的小點(diǎn)。因此, 通過(guò)觀察培養(yǎng)基的顏色、漂浮物、pH值或在顯微鏡下觀察細(xì)胞及其生長(zhǎng)狀態(tài), 從而能初步判斷該細(xì)胞是否受細(xì)菌、真菌污染。也可以使用培養(yǎng)檢測(cè)法：將細(xì)胞培養(yǎng)物在各類培養(yǎng)基中適溫培養(yǎng)若干天后, 觀察是否有細(xì)菌或真菌生長(zhǎng)。

支原體污染

支原體污染會(huì)影響細(xì)胞的形態(tài)、功能、代謝、細(xì)胞膜、生長(zhǎng)速率、誘導(dǎo)染色體畸變、細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)等各種細(xì)胞特性。細(xì)胞培養(yǎng)瓶中受支原體污染的細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)培養(yǎng)基的pH值不會(huì)發(fā)生改變, 也不會(huì)渾濁, 因此, 很難直接觀察出細(xì)胞是否受到污染。

常用的支原體檢測(cè)DNA熒光染色法：使用熒光染料DAPI或Hoechst 33258染色，熒光染料能選擇性的結(jié)合細(xì)胞和支原體DNA的小溝, 因此, 在準(zhǔn)備過(guò)程中, 任何存在的DNA均會(huì)被染色。被支原體污染的細(xì)胞經(jīng)染色后, 細(xì)胞核外與細(xì)胞周圍可看到許多大小均一的熒光點(diǎn)。

霉菌污染

霉菌污染早期，應(yīng)用PBS多次沖洗細(xì)胞，盡量將孢子洗掉，然后用兩性霉素處理。兩性霉素對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響也很大，濃度過(guò)高可致細(xì)胞死亡，濃度過(guò)低時(shí)則不能抑制霉菌生長(zhǎng)。

病毒污染

有關(guān)病毒污染的資料不多，但一般認(rèn)為病毒污染不影響細(xì)胞培養(yǎng)，通過(guò)PCR技術(shù)可以檢測(cè)。不過(guò)病毒污染對(duì)生產(chǎn)疫苗是不安全的。因此，至今，潛在病毒是細(xì)胞大量生產(chǎn)和疫苗、干擾素等生物制品制作的難題。有研究顯示用伽馬射線可清除牛血清的大部分病毒，現(xiàn)如今最值得期待的是下游工藝中除病毒過(guò)濾器的開(kāi)發(fā)。