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細(xì)胞工廠培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)胰酶配制
發(fā)表日期:2022-08-03

我們?cè)谑褂?a href="http://cxdzsw.cn/sbgc.html" target="_blank">細(xì)胞工廠時(shí)對(duì)生長(zhǎng)到一定程度的細(xì)胞就到了收獲的時(shí)候了,這時(shí)候就需要借助胰酶對(duì)細(xì)胞工廠上的細(xì)胞進(jìn)行消化后再收獲一般使用trypsin-EDTA 濃度為 0.25% trypsin-0.53 mM EDTA.2Na 或0.05%trypsin-0.02 mM EDTA.2Na。

首先我們先介紹一下胰酶:胰酶儲(chǔ)存的環(huán)境一般在–20°C左右,我們?cè)诮鈨鲆让傅钠毡槭窃?4°C 的環(huán)境中進(jìn)行,我們?cè)诘谝淮伍_(kāi)瓶后應(yīng)立即將胰酶少量分裝于無(wú)菌試管中,并保存于 –20°C環(huán)境中,這種操作是將反復(fù)冷凍解凍造成 trypsin 之活性降低的影響減少,而且這樣的操作流程也會(huì)降低污染的可能。

細(xì)胞工廠培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)胰酶配制_富道細(xì)胞

而我們?cè)诩?xì)胞工廠培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)胰酶配制也是很重要的一件事濃度過(guò)高時(shí),是很容易造成我們細(xì)胞培養(yǎng)基中細(xì)胞碎片增多、一些黑渣子的增多,所以我們?cè)诔R?guī)細(xì)胞傳代時(shí)建議用 0.05% 的胰酶進(jìn)行消化,對(duì)于難消化的細(xì)胞可采用 0.25% 胰酶進(jìn)行消化,而細(xì)胞工廠的細(xì)胞密度過(guò)高超過(guò) 80% 時(shí),我們可以采用分步消化法。而溶度過(guò)低時(shí)消化不足則細(xì)胞難以從瓶壁上吹下,反復(fù)吹打則會(huì)損傷細(xì)胞活性。因此,控制胰酶消化時(shí)間尤為重要。

當(dāng)然我們?cè)谑褂眉?xì)胞工廠或其他細(xì)胞培養(yǎng)耗材時(shí)不同細(xì)胞對(duì)胰酶消化液的敏感性不同,細(xì)胞對(duì)胰酶消化的時(shí)間也會(huì)有差異。對(duì)于新購(gòu)買的細(xì)胞,富道細(xì)胞建議我們先用低濃度的胰酶仔細(xì)去摸索一下消化時(shí)間,可每隔 1 分鐘鏡下觀察細(xì)胞是否變圓,記錄最佳消化時(shí)間,下一次操作時(shí)參考之前的記錄來(lái)控制時(shí)間即可。
 這就是富道細(xì)胞對(duì)細(xì)胞工廠培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)胰酶配制時(shí)的一些說(shuō)明,希望可以對(duì)各位細(xì)胞培養(yǎng)的時(shí)候能起到一定的幫助。

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